Diagnostické testy krav na mastitidu

Cena tohoto dokumentu zatím není známa. Klikněte na tlačítko “Koupit” a zadejte objednávku a my Vám zašleme cenu.

Od roku 1999 distribuujeme regulační dokumenty. Vyrážíme šeky, platíme daně, přijímáme všechny legální formy plateb za platby bez dalšího úroku. Naši klienti jsou chráněni zákonem. LLC “CNTI Normokontrol”

Naše ceny jsou nižší než jinde, protože spolupracujeme přímo s poskytovateli dokumentů.

Způsoby doručení

• Expresní doručení kurýrem (1-3 dny)
• Doručení kurýrem (7 dní)
• Vyzvednutí z moskevské kanceláře
• Ruská pošta

Pokyny jsou určeny pro výzkumné instituce, veterinární laboratoře zabývající se diagnostikou a léčbou mastitid.

Pokyny zahrnují metody vyšetření mléka a sekrece kravského vemena v diagnostice mastitid a obsahují moderní mikrobiologické metody dostupné pro praktické použití s ​​podrobným popisem receptur živných médií.

obsah

2. Speciální část

2.1. Pravidla pro odběr a výdej vzorků mléka

2.2. Vzorová pravidla doručení

2.3. Metody vyšetření mléka (sekrece vemene) krav na přítomnost patogenů mastitid

Aplikační média receptury

Tento dokument se nachází na adrese:

• Sekce Ekologie
  • Oddíl 11 ZDRAVÍ
    • Sekce 11.220 Veterinární lékařství

    Organizace:

    Vyvinul	Všeruský výzkumný ústav veterinární hygieny
    Vyvinul	Republiková výzkumná a výrobní laboratoř Ruské federace
    schválený	Ruská akademie zemědělských věd

    Že бесплатно stáhněte si tento dokument ve formátu PDF, podpořte naše stránky a klikněte na tlačítko:

    RUSKÁ AKADEMIE ZEMĚDĚLSKÝCH VĚD

    O MIKROBIOLOGICKÉM STUDII MLÉKA A TAJEMSTVÍ VEMEN KRÁV PRO DIAGNOSTIKU MASTITIDY

    RUSKÁ AKADEMIE ZEMĚDĚLSKÝCH VĚD

    O MIKROBIOLOGICKÉM STUDIU MLÉKA A SEKRÉCE VEMEN PRO DIAGNOSTIKU MASTITID

    vzorky mléka se připravují zředěné 1:100 ve sterilním fyziologickém roztoku.

    Do Petriho misky s krevním novokainem nebo DNA novokainovým agarem (odpor. 4,5) se přidá 0,1 cm 3 mléka z ředění 1:100 a skleněnou špachtlí se rovnoměrně rozetře po celém povrchu živného média.

    Nasazené kelímky se umístí do termostatu víčky dolů a inkubují se při 37 ± 1 °C po dobu 22-24 hod. Staphylococcus aureus roste ve formě velkých kulatých kolonií s hladkými okraji na DNA-novokainovém agaru, na novokainovém krevním agaru, kolem kolonie je vyjádřena zóna hemolýzy. Kelímky s DNA novokainovým agarem se nalijí IV roztokem kyseliny chlorovodíkové a poté se prohlížejí v procházejícím světle. Detekce kolonií obklopených zónou osvícení s jasnými hranicemi nebo zónou hemolýzy (na krevním agaru) indikuje přítomnost Staphylococcus aureus v testovaném materiálu.

    Pro stanovení množství Staphylococcus aureus v 3 cm 10 testovaného materiálu se spočítají kolonie s clearingovými zónami po celém povrchu média a výsledný počet kolonií se vynásobí 0,1 (objem inokula je 3 cm XNUMX) a stupeň zředění materiálu.

    Například: 0,1 cm 8 mléka bylo zaseto z ředění 1:100.

    Jako výsledek počítání bylo získáno 15 kolonií. V 3 cm 15000 mléka je tedy 15 10 mikrobiálních buněk Staphylococcus aureus (100xXNUMXxXNUMX).

    2.3.5.12. Vyhodnocení výsledků

    Staphylococcus species s. aureus, které mají hemolytickou aktivitu, plazmatické koagulační vlastnosti nebo aktivitu DNázy a rozkládají mannitol za anaerobních podmínek, jsou klasifikovány jako původci mastitidy. V mléce krav s mastitidou, na a –

    častěji obsahují staphylococcus species s, aureus, s hemo-lytic-us, s. epidermidis, Staphylococcus species S. saprophiticus je původcem mastitidy a díky své kontaminaci se vyskytuje v mléce zdravých i nemocných krav.

    2.3.5LZ. Fágová typizace stafylokoka

    Pokud je nutné určit zdroj stafylokokové infekce, provádí se fágová typizace kultur stafylokoků izolovaných z mléka a sekretu kravského vemena pomocí sady stafylokokových bakteriofágů živočišného původu, vyráběné Výzkumným ústavem epidemiologie a mikrobiologie pojmenovaným po N.F. Gamaleya. Kultury stafylokoků podléhají fágové typizaci, což způsobuje hemolýzu erytrocytů u skotu a koagulaci králičí krevní plazmy.

    Lyofilizované fágy obsažené v baňkách o objemu 0,1 cm 3 se resuspendují v 3 cm 0,4 BCH (s 4 # glukózy a H), 10 chloridu vápenatém (CaCl^), při základním ředění 1”* (10: 100). Z hlavního ředění fága se připraví dvě pracovní ředění odpovídající ředění I testu (TR) a XNUMX TP. Ředění odpovídající jednomu TP je uvedeno na štítku.

    Hlavní ředění fágů 10”* se skladuje při 4°C a spotřebuje se během 1,5-2 měsíců. Fágové ředění odpovídající TP I by se mělo připravovat znovu každých 7 dní z hlavního ředění 10”*.

    Denní agarová kultura testovaného kmene stafylokoka se naočkuje do prostředí 2,5 cm). Současně se připraví plotny s 3% Hottingerovým agarem obsahujícím 7,2 mg% aminového dusíku; 7,4 %

    glukózy a 0,02 % chloridu vápenatého. Chlorid vápenatý se před nalitím do kelímků přidá k čtečce ochlazené na 45 °C (přehled č. 9).

    15 cm30 roztaveného agaru se nalije do Petriho misek a po ztuhnutí se suší 40-37 minut při 40 £ l °C. Vypěstovaná tříhodinová kultura staphylococcus aureus se zavede do šálků pomocí Pasteurovy pipety a povrch agaru se zavlažuje. Přebytečná kultura se odsaje Pasteurovou pipetou a odstraní, načež se agar znovu suší po dobu 60-37 minut při XNUMXjtI°C.

    Dno naočkované misky se nakreslí tužkou na sklenici do čtverců podle šablony podle počtu použitých fágů.

    Pasteurovou pipetou s tenkým koncem nebo standardní smyčkou se aplikuje kapka odpovídajícího fága na každý čtvereček inokulovaného média. Jeden čtverec je ponechán pro kontrolu bez fága. Po aplikaci každého fága se smyčka odpálí, Pasteurova pipeta se zlikviduje. Po zaschnutí fágových kapek se kelímky obrátí dnem vzhůru a inkubují se po dobu 5-6 hodin při teplotě 37 °C; 0 °C a poté se nechají 18-20 hodin při teplotě místnosti. Aplikace fágů na agarové desky může být prováděna pomocí speciálního přístroje pro fágovou typizaci stafylokoků, který má 25 kovových tyčinek upevněných ve čtvercové desce spojené s pístem. Základem zařízení je plošina z organického skla, na které je volně pohyblivá druhá plošina s paticí pro upevnění naočkované misky a fluoroplastová destička se zásobníkem na fágy. 3-5 kapek fágů se nalije do rezervoárů sterilní fluoroplastové destičky umístěné ve sterilní Petriho misce (vždy ve stejném pořadí). Agarová destička a fágová destička se umístí na pohyblivou destičku. Střídavým pohybem plošiny se pod kovové tyče umístí nejprve talíř s fágy a poté miska s agarem. Spouštění a zvedání tyčí s pomocí

    fágové kapky jsou přeneseny na agarovou misku, sotva se dotýkají jejího povrchu* Misky se mění v závislosti na počtu typizovaných kultur. Misky s fágy se nechají na stole po dobu 30-40 minut a poté se zavlažují čtyřhodinovou bujónovou kulturou stafylokoků* teploty.

    Pro fágovou typizaci kmenů stafylokoků použijte nejprve první pracovní ředění odpovídající I TR. Kultury stafylokoků, které nebyly lyžovány alespoň jedním fágem, jsou přetypovány podobnými fágy při ředění 100 TP.

    Účetnictví a evidence výsledků

    Stupeň lýzy kultury různými ředěními fágů se zaznamenává podle následujícího schématu: (++++) – konfluentní úplná lýza, (+++) – neúplná konfluentní lýza (mírný růst kultury v zóně lýzy), (+ +) – přítomnost kapky v místě aplikace fágu více než 50 lyzačních skvrn (kolonií fága), (+) – 20 až 50 lyzačních skvrn,

    (±) „méně než 20, (-) – úplná absence lýzy. Pro zjednodušení schématu účtování stupně lýzy lze označení ++++, +++, ++ a nazývané „silná reakce“ zaregistrovat pod jedním označením ++*

    Stejná kultura stafylokoka je častěji lyžována ne jedním, ale několika fágy, což vytváří charakteristickou fagomozaiku pro každý kmen.

    Kmeny jsou považovány za typovatelné, pokud alespoň jeden fág způsobil reakci se skóre alespoň ++. Pokud se při typizaci kultury s fágem v ředění I TP získá slabá reakce se skóre + nebo it, pak se takový kmen přetypuje s fágem v ředění TOLP TP. Výsledky fágové typizace kultur jsou zaznamenány ve formě tabulky s uvedením názvu kmene stafylokoka, čísla w ředění fágů, se kterými byla získána lýza kultury (I TP popř.

    Pokud jsou kultury stafylokoků lyžovány stejnými fágy a tvoří jednu mozaiku, měly by být považovány za identické.

    V případech, kdy se mozaika liší o 1,2 nebo více silných reakcí, je třeba vycházet z následujícího pravidla: pokud se stafylokokové kmeny při typizaci ve stejný den liší silnou reakcí na jeden fág, měly by být považovány za identické, pokud je rozdíl dva a více fágů, kmeny by měly být rozpoznány jako odlišné.

    Výsledky jsou zaznamenávány v souladu s „Směrnicí pro použití bakteriofágů“ (schváleno Ministerstvem zdravotnictví SSSR dne 04.1976. dubna 16.09.1976, dohodnuto s GUB Ministerstva zemědělství SSSR dne XNUMX. září XNUMX).

    2.3.6. Izolace a identifikace streptokoků

    2.3.6.1. K izolaci streptokoků z mléka se používá krevní agar (recenze č. I) nebo jedno z následujících volitelných médií – tekuté Kartashova médium (recenze č. 10), Kartashova pevné médium (recenze č. II), Edwardsovo médium (recenze č. > 12).

    Na krevním agaru rostou streptokoky ve formě malých rosiformních nebo malých neprůhledných kolonií s malou zelenohnědou průsvitnou zónou hemolýzy nebo bez hemolýzy. V tenké vrstvě 5-7] krevního agaru je hemolytická zóna zřetelněji vyjádřena a může být absolutně průhledná.

    S růstem streptokoků v kapalném médiu se barva média mění z modré na zelenou v důsledku fermentace laktózy. Při použití hustého média na pozadí modrého agaru rostou malé průhledné kolonie jp-formy, kolem kterých médium zezelená.

    Na Edwardsově médiu rostou streptokoky ve formě malých (1-2 mm v průměru) kolonií, bezbarvé nebo šedomodré (přehled č. 12) *

    2.3.6.2. V nátěrech z kultur v tekutých živných médiích mají streptokoky formu různě dlouhých řetězců, v nátěrech z hustých médií jsou streptokoky umístěny v párech nebo ve formě krátkých řetězců *

    Pro další diferenciaci se část kultury subkultivuje na šikmém sérovém agaru.

    2.3*6*3. Jedním z charakteristických rysů streptokoků, na rozdíl od stafylokoků, je absence katalázové aktivity (kataláza-negativní). Pro stanovení katalázové aktivity se kultura streptokoka pěstovaná na hustém médiu odebere kličkou a trituruje se v kapce 10-N-peroxidu vodíku (perhydrol se ředí v poměru 1:3) na podložním sklíčku. K uvolňování plynu při tření kultury streptokoků (na rozdíl od stafylokoků) nedochází – reakce je negativní.

    2*3.6.4-. Diferenciace streptokoků se provádí podle testů uvedených v tabulce 2.

    V mléce krav s mastitidou, Str. agalactiae, Str.di8galactiee, Str.uberi8STpenTQK0KKH Strlas-tis, Str.cremorie₍5tr. faecalie nejsou původci mastitid a díky své kontaminaci se vyskytují v mléce zdravých i nemocných krav.

    Pro zrychlenou detekci Str. agaiactiae, v prvé řadě se provádí test CAMP, který je pozitivní na tento typ streptokoka a může být na str. uberis.

    2.3.6.5. Nastavení testu KAMP

    Denní agarová nebo bujónová kultura hemolytického stafylokoka se naočkuje na krevní agar 7-8] £ defibrinované nebo nitrátové krve skotu (přehled č. I). Výsev se provádí pocením ve formě plné čáry po průměru kalíšku popř. kruhová čára po obvodu krevního agaru v Petriho misce. Por-

    READ

    Jak množit fikus doma: způsoby sezení